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荧光检测滤光片

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荧光滤光片是应用于生物医学和生命科学仪器的关键元件,主要作用是在生物医学荧光检验分析系统中分离和选择物质的激发光与发射荧光的特征波段光谱。

荧光滤光片的典型特征是截止深度深,自发荧光小,而且要求透射面形好,利于荧光成像的提取。所以较好的荧光滤光片采用单片无色透明的玻璃作为基底,在玻璃的两个表面镀膜。相比常规的用多片胶合或颜色玻璃辅助截止的荧光滤光片,单片式在荧光成像上有明显优势,但由于单片式的荧光滤光片的制作难度很高,所以成本较高。

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物体发什么颜色的光是因为它吸收了其它颜色的光而反射该颜色的光,如FITC能吸收可见光谱中的蓝色光,而发射黄绿色荧光。荧光的强度远弱于激发光,波长要长于激发光,这一点大家都知道。激发滤光片的作用是除去波长与荧光光谱段相同的那部分激发光,即激发光中长波段。发射滤光片/接收滤光片:从荧光中除去短波部分激发光(注意,仍是针对激发光)。

所以,荧光设备应是如此工作,激发光源发射出激发光,到达激发滤光片后被除去与发射荧光重合部分的长波段,然后到达荧光团,发射长波荧光,再到达发射滤光片,被除去低于此荧光波长的短波激发光,得到波段狭窄的荧光,从而不受强度远大于荧光本身的激发光干扰。

滤光片如标有cut-in 515,则表示515以上的波段能通过,依此类推。而透析袋是cut-off 5KDa,表示5000以上分子量不能通过。但滤光片并不能精确截止某个波段的光,而只是一个正态分布高斯峰的最高点。

截止型滤光片:通过长于某个特定波长的滤光片,如只能通过大于700nm的激发光。

带通滤光片:通过某个特定波长范围内的滤光片,如700-800nm。

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